競爭法學原理
㈠ ELISA實驗中,夾心法和競爭法的區別是什麼
雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體.洗滌除去未結合的抗體及雜質.
2) 加受檢標本,保溫反應.標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物.洗滌除去其他未結合物質.
3) 加酶標抗體,保溫反應.固相
免疫
復合物上的抗原與酶標抗體結合.徹底洗滌未結合的酶標抗體.此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關.
4) 加底物顯色.固相上的酶催化底物成為有色產物.通過比色,測知標本中抗原的量.在臨床檢驗中,此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法.如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物.如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用於包被固相載體和制備酶結合物.這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測.
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物".類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象,此時反應後顯色的吸光值(位於抗原過剩帶上)與標准曲線(位於抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果將低於實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落.鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果.因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的最高值.用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應.
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物.但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題.
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾.RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合.用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應.採用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由於去除了Fc段,從而消除RF的干擾.雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標(參見6.2).
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心.
2.2 雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似.用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體.與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體.此法中受檢標本不需稀釋,可直接用於測定,因此其敏感度相對高於間接法.乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法.本法關鍵在於酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法.
競爭法測抗體
當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體.其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合.標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺於陰性反應.如抗原為高純度的,可直接包被固相.如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可採用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然後加入抗原,形成固相抗原.洗滌除去抗原中的雜質,然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應.競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBc ELISA一般採用此法.另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌後再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應.抗HBe的檢測一般採用此法.
2.5 競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以採用競爭法模式.其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合.標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,最後的顯色也愈淺.小分子激素,葯物等ELISA測定多用此法.
㈡ 用唯物辯證法原理談談如何正確對待自己的競爭對手
可以用矛盾普遍性的觀點,一分為二地分析對手:既要看到對手的優勢方面,又要看到對手的不足和缺陷。
用矛盾特殊性的觀點,具體問題具體分析:對於對手的優點和優勢,可以向他學習,取他人之長,補自己之短;對於對手的不足和缺點,可以採取針對性的措施,爭取在競爭中戰勝對手。
㈢ Elisa競爭法抑制試驗原理是什麼,誰能提供相關資料,謝謝
針對於HBeAb的中和抑製法
採用抗-HBe抗體包被反應板,加入校準品及被測樣本,同時加入定量HBeAg中和抗原,經過振盪孵育,洗板後再加入銪標記的抗-HBe,若標本中抗-HBe濃度高,HBeAg將被大量中和,使最後形成的抗-HBe-HBeAg-銪標記抗-HBe復合物減少。增強液(β-NTA)將標記在抗體上的Eu3+解離到溶液中,Eu3+和增強液中的有效成分形成高熒光強度的螯合物,熒光強度和樣本中的抗-HBe濃度成反比。
㈣ 電大《競爭法學》案例分析題
你的問題好長啊,沒時間看,
而且你沒懸賞分,題目又這么長,誰會來回答。
㈤ 競爭理論與競爭法之間的關系是怎樣的
法的作用與法的功能也不是同一的概念。就競爭法的作用與競爭法的功能之間的關系而言,由於「法的作用是法的功能的外化和現實化」[3],因此,盡管兩者有相同之處,但是它們所反映的內涵及所體現的意義卻有所區別:競爭法的功能是競爭法作用的基礎與前提,而競爭法的作用則是競爭法功能在社會實踐中實施的體現。因此,競爭法的作用與競爭法的功能這兩個概念不能等同使用,競爭法的作用不能替代競爭法的功能。
㈥ 論述題 反不正當競爭法的理論基礎
(一)不正當競爭行為的概念及特徵
不正當競爭行為是指經營者違背自願、平等、公平、誠實信用的原則和公認的商業道德,損害其他經營者的合法權益,擾亂社會經濟秩序的行為。不正當競爭行為具有如下特徵:
1.主體的特定性。不正當競爭行為是經營者在競爭活動中的違法行為。這里所稱經營者是指從事商品經營或者營利性服務的法人、其他經濟組織和個人。
2.行為的反道德性。不正當競爭行為違背了自願、平等、公平、誠實信用等公認的交易原則和商業道德。
3.後果的危害性。不正當競爭行為的危害性後果主要表現在侵犯競爭者和消費者合法權益,損害市場機制和市場秩序。此外,商業賄賂等不正當競爭行為還敗壞了社會風氣。
(二)反不正當競爭法的概念
反不正當競爭法是指調整在國家規制不正當競爭行為規程中發生的社會關系的法律規范的總稱。
(三)《反不正當競爭法》中的法律責任與救濟制度
㈦ 免疫學中競爭法的基本原理是什麼(抗原與抗體間)
1、把抗原或抗體結合到某種固相載體表面,並保持其免疫活性。
2、把抗原或抗體與某一種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。
在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。
加入酶反應的底物後,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由於酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用於測定抗原,也可用於測定抗體。
(7)競爭法學原理擴展閱讀:
在抗原和抗體概念確立後,人們對其理化性質、抗原與抗體特異性結合的化學基礎等問題產生了興趣。20 世紀初, Landsteiner 等應用偶氮蛋白的人工結合抗原,即以芳香族有機化學分子偶聯到蛋白質分子上形成的抗原,研究抗原抗體反應特異性的物質基礎,從中認識到,抗原特異性實際上是由一些小分子的結構及構象決定的,進而提出了關於抗原抗體反應的格子學說,從理論上解釋了血清學反應現象。
20 世紀 30 年代, Tiselies 和 Kabot 建立了血清電泳技術,證明抗體是丙種球蛋白,並利用分離、純化抗體的方法對抗體分子的結構與功能進行研究。Grubar 等人建立了免疫電泳技術,發現了抗體分子的不均一性的本質,從而使抗體分子與結構研究取得了重大進展。
㈧ 競爭性抑制的原理
酶的競爭性抑制 抑制劑是通過與酶結合而使其無法再與反應底物結合。競爭性抑制劑占據了酶的活性位點而使底物無法進入。
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㈨ 關於間接競爭ELISA法
直接競爭ELISA和間接競爭ELISA區別 1、直接競爭,標記抗原,與檢測樣品中的抗原競爭抗體。 2、間接競爭,標記抗體,固相抗原與液相抗原(樣品)競爭標記抗體。 3、定義間接競爭法的模型:包被抗原,用HRP-抗體與樣本一起加入。樣本中的Ag與Solid-Ag競爭HRP-Ab,固相吸附的HRP-Ab與樣本中的Ag濃度成反比。直接競爭法的模型:包被抗體,用HRP-抗原與樣本一起加入。樣本中的Ag與HRP-Ag競爭Solid-Ab,固相吸附的HRP-Ag與樣本中的Ag濃度成反比。 4、競爭法的理論基礎:是限量抗體。只有在限量抗體基礎上,兩種抗原才會形成競爭關系。 5、、間接競爭法具備較高靈敏度原因。直接競爭法里,標記抗原與待測抗原均是液相,與抗體的結合機會是一樣的,例如有1份標記抗原與1份待測抗原競爭1份抗體,那麼有50%的標記抗原能與抗體結合,所以標記抗原的相對結合率為50%。間接法里,固相抗原與抗體的接觸面積較小,固相抗原與待測抗原的結合抗體機會是不平等的,接近順序飽和法,即只有與待測抗原結合剩餘的抗體才會與固相抗原結合,同樣有1份固相抗原與1份待測抗原競爭1份抗體時,基本上抗體會被待測抗原中和掉,與固相抗原結合的抗體非常少。固相抗原的相對結合率為0%。因此,間接法的抑制曲線斜率會大於競爭法。因為抑制率越大則斜率越大,從而靈敏度越大。(假設零管變異5%,以兩倍SD為靈敏度限,則為90%相對結合率,則間接法可以在較低的待測抗原濃度達到這一相對結合率,因此靈敏度要高。)在進行系統放大時,間接法一般可以使用酶標二抗。因為二抗可以針對抗體的多個部位,所以存在放大效應,從而能提高間接法的靈敏度。直接法一般難以進行放大,常用的有生物 素化抗原與酶標親和素,但模式上似乎不存在放大效應。 6、間接法的高靈敏度難以實現的原因:雙抗體 夾心的免放(IRMA)模式剛出現時,也被模型證明靈敏度優於競爭法的放免(RIA),原因也是較大的斜率,但是IRMA的高靈敏度一直到單抗發展後才得以實現。
㈩ ELISA的夾心法和競爭法的區別
1、標記不同
競爭,標記抗原,與檢測樣品中的抗原競爭抗體。
夾心:標記抗體,固相抗原與液相抗原(樣品)競爭標記抗體。
2、模型不同
競爭法的模型:包被抗原,用HRP-抗體與樣本一起加入。樣本中的Ag與Solid-Ag競爭HRP-Ab,固相吸附的HRP-Ab與樣本中的Ag濃度成反比。
夾心法的模型:包被抗體,用HRP-抗原與樣本一起加入。樣本中的Ag與HRP-Ag競爭Solid-Ab,固相吸附的HRP-Ag與樣本中的Ag濃度成反比。
基本原理
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,並保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。
以上內容參考:網路-酶聯免疫吸附測定法